两种片形吸虫感染山羊的对比试验
片形吸虫病是在全球范围广泛流行，并对人有一定危害的寄生虫病。在大部分地区该病病原为肝片形吸虫（Fasciola hepatica），非洲、亚洲的热带地区是大片形吸虫（F.gigantica）。据本地的资料和以往的研究显示，广西主要是大片形吸虫。由于国内外〖CM(22〗对肝片形吸虫的研究较多，对大片形吸虫的研究较少，使得国内一些研究未能注意到这两个种的虫在对动物的致病性及其所引起的免疫反应等方面的差别。很多试验表明，大片形吸虫与肝片形吸虫有相似的一面，也有其各自的特点，为了进一步了解、探讨这些差别，我们做了系列试验。本试验是通过两个种的片形吸虫人工感染山羊，比较虫体的生物学、宿主的病理学、免疫应答的动态变化和规律，以便逐步探明两个种的片形吸虫与不同宿主之间的相互关系，为进一步研究片形吸虫的防治提供有用的资料。
1 材料与方法
1.1 实验动物为20头6月龄、体重相当的本地山羊，经粪便检查无吸虫卵，ELISA检测片形吸虫抗体阴性，进行适应性饲养1周后用伊维菌素驱除体内外寄生虫。舍饲配合饲料。
1.2 片形吸虫囊蚴 肝片形吸虫囊蚴为法国
INRA寄生虫实验室惠赠，大片形吸虫囊蚴为本实验室培养。具体方法为：取本地水牛自然感染的肝蛭经鉴定为大片形吸虫，收集虫卵孵出毛蚴，感染椎实螺，培养出囊蚴保存在4℃的冰箱中。
1.3 试验方法 20只山羊随机分为A、B、C、D 4组，每组5只羊。A组感染肝片形吸虫，B组感染大片形吸虫，每只羊一次经口感染片形吸虫囊蚴220个。C组感染2种片形吸虫囊蚴各110个，D组设为对照。各组隔离饲养，饲养条件相同。
从第7周起所有羊经直肠取粪便，用廖党金（1996）虫卵计数法计算每克粪便虫卵数（EPG）。所有羊每月测体重1次，记录其采食量以及临床表现。第16周试验结束，剖杀山羊称重比较，收集体内片形吸虫，观察肝脏病变，测量虫体。
2 结果
2.1 临床症状观察 试验过程中，绝大部分受感染的山羊都表现出临床症状：逐渐消瘦，被毛粗乱，眼结膜苍白的贫血症状，偶尔有个别羊拉稀，有时个别出现便秘，说明这220个囊蚴的剂量能导致山羊的亚急性感染。从试验开始到7周各组羊平均体重略有增加，结束时，感染组（A，B，C）的羊平均体重（kg）均有所下降，各组之间差异不显著。对照组的体重增加与感染组相比差异显著（P＜0.05）。
2.2 虫卵检查结果 感染肝片形吸虫的A组有3只羊在第10周、1只羊在第9周，另1只羊在11周粪便中开始出现虫卵；感染大片形吸虫的B组，4只羊于12周、1只羊于第11周出现虫卵；混合感染的C组2只羊在第10周、3只羊在11周出现虫卵。肝片形吸虫组的虫卵数总体水平最高，混合组次之，大片形吸虫组最低。各组虫卵数在15周达到最高水平，16周略有下降。
2.3 肝脏病变 肝脏颜色变淡直至变黄，严重时肝质地变硬、体积变小，肝表面有不同程度的纤维素性渗出物、凸凹不平、粗糙、质地变硬。切开见有的部位变硬，没有肝脏的正常结构。有时肝表面可见红色或灰白色虫道，有些已成大小不等的坏死灶，切开虫道或坏死灶见内有少量灰白色的脓汁，胆管变粗、增厚，有的部位有黑色的炭化物堵塞胆管。胆囊有的萎缩，有的增大，胆囊壁有少量出血点，胆汁墨绿色。病变最严重的羊（C5）肝脏与瘤胃、膈肌严重粘连，表面苍白，有大量纤维素性渗出物，并有多个干酪样结节和较大的脓肿。
比较3个组试验羊肝脏的颜色、外形、坏死情况等病理变化，感染肝片形吸虫的A组病理变化较轻。感染大片形吸虫的B组比A组羊肝脏质地更硬、颜色更黄、表面凹凸不平及纤维素性渗出物更多，4/5的羊肝脏有1～3个1.5 cm×1.2 cm至2 cm×3 cm的坏死灶，B2号羊多达4个坏死灶，B3号羊肺部有一个4 cm2的坏死灶。感染两种片形吸虫的C组试验羊除以上所述病变外，较严重的有3只羊，C1号羊整个肝脏有比较严重的纤维素性渗出物，左叶部分肝硬变，有3个灰白色坏死灶，一个约2 cm×3 cm大，其余为指尖大小，和一个凹陷的红色陈旧出血灶，肝小叶有一个出血灶，肝门淋巴结肿大，切开见灰白色坏死灶内有脓汁。C2号羊肝脏右叶部分硬变，有坏死区，左叶边缘有坏死灶，切开见坏死部位失去正常结构，刀切有沙沙声。C5号羊的肝脏与瘤胃、膈肌严重粘连，表面苍白，有大量纤维素性渗出物，并有多个干酪样结节和较大的脓肿，切开见整个肝脏大部分坏死，有灰白色的脓汁，胆管增厚，内有黑色炭化物。
2.4 囊蚴感染存活率及虫体测量结果 囊蚴感染存活率是指试验结束从感染山羊体内收集到的吸虫数量占感染该山羊的囊蚴剂量的百分数。
表1 各试验组收集的片形吸虫情况 (条)
1号 2号 3号 4号 5号 平均
A组 肝脏 79 37 70 34 48 53.6
感染肝片形吸虫 肠道 24 49 13 7 34 25.4
总计 103 86 83 41 82 79
B组 肝脏 38 31 71 58 73 54.4
感染大片形吸虫 肠道 1 7 2 0 2 2.2
总计 39 38 73 58 75 56.6
C组 肝脏 54 47 58 40 69 53.6
感染两种片形吸虫 肠道 10 17 1 5 5 7.6
总计 64 64 59 45 74 61.2
D组 不感染对照组 总计 0 0 0 0 0 0
A组每只山羊平均收虫79条，平均收虫率为35.91±10.41%；B组平均收虫56.6条，平均收虫率为25.73±8.08%；C组平均收虫61.2条，平均收虫率为27.82±4.80%。虫体自然死亡在完全伸展状态下，肝片形吸虫的平均大小为22.28×10.08 mm，大片形吸虫的平均长宽为29.52×8.68 mm(混合组大片形吸虫分别为27.47×9.52 mm，混合组肝片形吸虫大小分别为 24.12×9.43 mm)。 对照组5只山羊剖检后未见异常，肝脏内未见有片形吸虫。
3 讨论
3.1 在这次的试验过程中，绝大部分受感染的山羊都表现出片形吸虫病临床症状：逐渐消瘦，被毛粗乱，眼结膜苍白，偶尔有个别羊下痢，或便秘，说明感染220个片形吸虫囊蚴的剂量能导致山羊的慢性至亚急性感染。
3.2 资料显示不同动物感染两种片形吸虫的虫卵出现的时间有差异。Abbas M K等
（1986）用绵羊感染大片形吸虫15周后发现虫卵，EPG呈逐渐上升趋势直到24周。Esther E等 (1995)用绵羊感染大片形吸虫最早9周后发现虫卵。本试验3/5感染肝片形吸虫的羊在第10周发现虫卵，4/5感染大片形吸虫的羊在12周出现虫卵，这表明肝片形吸虫的成熟时间比大片形吸虫早1~2周。虫卵开始出现一直到试验结束,虫卵数呈逐渐上升趋势，在16周时出现的下降因试验结束不能肯定是否正常。统计整个试验期平均每虫排卵量（EPG）肝片形吸虫为2.04，大片形吸虫为1.2。
3.3 在片形吸虫人工感染试验的报道中，受感染绵羊与山羊的收虫率一般为20%~30%，水牛
一般为10%~25%，但有人用1 000个囊蚴感染水牛平均收虫率达到36.8% (±11.0) ，用200个肝片形吸虫囊蚴感染山羊收虫率为19.7%～24.3% 。一般认为绵羊对肝片形吸虫易感，对大片形吸虫易感性较低。
我们的试验结果，收虫率A组明显高于B、C组，普遍较高。但同时我们发现，绝大部分山羊在小肠内都找到了片形吸虫，个别在大肠还能找到虫体，尤其是感染肝片形吸虫的A组，有32%的虫体在肠道。肠道不是片形吸虫的正常寄生部位，不可能长期存活，因此如果只计算第16周肝脏内的虫体，3个组平均收虫率为24.4%~24.7%。考虑到大片形吸虫比肝片形吸虫晚2周成熟，是否2周后肝脏载虫率会有所下降，有待进一步研究。以前未见过片形吸虫成虫在肠道的报道。我们在几次试验中无意发现肠道内有片形吸虫，此次才注意检查全肠道，结果发现14只羊肠道内均有虫。这种现象以前未被注意。分析其原因，一种可能性是进行片形吸虫感染试验时一般只检查肝脏及附近脏器，忽略检查肠道，另一种可能是只有感染后的某个阶段在肝脏已成熟的虫体会排除一部分，别人的试验均未在此期间结束，因此见不到成虫在肠道。由于宿主对片形吸虫感染的抵抗，或是虫体之间生物性协调，存活虫体数一般随着感染时间的延长逐渐降低，直至达到一个相对平衡的载虫量。A.MartinezMoreno等的试验在24周结束，我们是在16周结束，如果试验到24周或更久，存活虫
体数是否还会下降，有待进一步研究。
3.4 病理变化方面， C组肝脏病变最为严重，出现肝脏大面积化脓坏死，这可能是两种虫之间存在某种协同作用的结果，B组的次之，A组病变相对较轻。Abbas等认为大片形吸虫对宿主的致死量比肝片形吸虫要低，EL Samani F等报道用200个大片形吸虫囊蚴感染的所有沙漠绵羊表现出严重的肝损害。150～500个大片形吸虫囊蚴感染ITT羊，大多数羊已有中等程度的肝实质损坏，收虫率只有5%。说明即使大片形吸虫在ITT羊体内很难发育成熟，但仍给宿主造成一定的损害。我们用两种片形吸虫感染兔和本试验都证实了这点。在生产及其他试验中也注意到大片形吸虫感染时肝病变严重而虫少的现象。
3.5 从虫体的形态学观察发现，如果活的成熟虫体肌肉完全松弛，充分舒展，从外形观察可以区分肝片形吸虫和大片形吸虫。但遇到不同发育阶段的虫体，不同固定条件，虫体形状未必标准，仅从整体形状、肩部和后端形状观察并不全面。在长期观察中我们认为看其睾丸后部位置与体长的比例较为准确。肝片形吸虫睾丸约达到体长的后2/3~3/5以上，而大片形吸虫的睾丸占其体长不超过1/2；此外，大片形吸虫的肠道分枝多，并有较多内分枝，而肝片形吸虫肠道分枝少，内分枝少且短。
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